ABSTRACT
La biopelícula como un mecanismo de virulencia en Staphylococcus involucrada en infecciones intrahospitalarias es regulada por un represor negativo icaR, responsable de la transcripción completa del operón icaADBC. La búsqueda de dominios funcionales por modulación computacional de icaR permitió hallar las secuencias peptídicas con actividad biológica análoga a la proteína icaR. Mediante biología computacional se diseñaron péptidos empleando el programa de predicción AntiBP (http://www.imtech.res.in/raghava/antibp/); la síntesis química se hizo por Nα-Fmoc y se caracterizaron y purificaron tres moléculas por RP-HPLC y MALDI-TOF. Se evaluó su seguridad biológica mediante ensayo de actividad citotóxica realizada sobre macrófagos murinos de la línea J774 y la actividad hemolítica se determinó mediante el uso de glóbulos rojos. Los tres péptidos caracterizados IR1, IR2 e IR3, presentaron estructura secundaria predominantemente alfa helicoidal, alto grado de pureza y alto score antimicrobiano; además, mostraron baja toxicidad, evidenciada por la actividad citotóxica y hemolítica en las concentraciones ensayadas y en comparación con los controles usados, que permitiría su potencial uso como moléculas candidatas o principios activos con actividad análoga al represor nativo icaR, frente a la biopelícula de los Staphylococcus sp.
Staphylococcus sp. biofilm, formed as a mechanism of virulence that is involved in hospital acquired infections, is regulated by a negative repressor icaR, which is responsible for the full transcription of the operon icaADBC. This study, through functional commands by computational modulation of icaR, allowed to find peptide sequences with similar biological activity to the icaR protein. Peptides were designed by means of computational biology using the prediction program AntiBP (http://www.imtech.res.in/raghava/antibp/). The chemical synthesis of peptides was performed by Nα-Fmoc. The purification and characterization of three molecules were carried out using RP-HPLC and MALDI-TOF. Biological safety of peptides was evaluated by tests of cytotoxic activity on murine macrophage cells line J774, and their hemolytic activity was determined by using red cells. The three characterized peptides IR1, IR2 and IR3 presented a predominantly secondary alpha helical structure with a high degree of purity and high antimicrobial scores. In addition, the peptides exhibited low toxicity, proved by their low cytotoxic and hemolytic activity in the tested concentrations and in comparison to the standards used. These results allow the potential use of these peptides as candidate molecules or active principles with similar activity to the native repressor icaR against the Staphylococcus biofilm.
O biofilme formado como um mecanismo de virulência em Staphylococcus sp., que está envolvido com infecções intra-hospitalares, é regulado por um repressor negativo icaR, o qual é responsável pela plena transcrição do operão icaADBC. Por tanto, o presente estudo, avaliando a segurança biológica de moléculas, concebeu peptídeos antibiofilme semelhantes ao repressor icaR. Por meio da biologia computacional foram concebidos peptídeos usando o programa de predição AntiBP (http://www.imtech.res.in/raghava/antibp/) para identificar as sequências com uma atividade biologicamente similar à da proteína icaR. A Síntese química dos peptídeos se fez pelo Nα-Fmoc e foram caracterizadas e purificadas três moléculas por RP-HPLC e MALDI-TOF. O ensaio de atividade citotóxica foi realizado nos macrófagos murinos da linha J774 e a atividade hemolítica foi determinada por meio do uso de glóbulos vermelhos. Foram caraterizados três peptídeos IR1, IR2 e IR3, além de mostrarem uma estrutura secundaria predominantemente alfa helicoidal, com alto grau de pureza, alto score antimicrobiano e baixa toxicidade, estes podem ser postulados como moléculas candidatas ou princípios ativos com uma atividade similar ao repressor nativo icaR frente ao biofilme dos Staphylococcus sp.
ABSTRACT
Antecedentes. La asociación entre asma bronquial y reflujo gastroesofágico provoca en los pacientes un pronóstico reservado que de no ser diagnosticado y tratado correctamente interfiere de manera significativa en la calidad de vida. Material y método. Con el propósito de establecer una relación entre el asma bronquial alérgica del adulto, paciente con síntomas digestivos y voluntarios sanos, se realizó un estudio en 162 sujetos con estas características a los que se les efectuó esofagograma buscando reflujo gastroesoágico. Resultados. El reflujo en los asmáticos fue de 87.23 por ciento y en los pacientes con trastornos digestivos, 39.53 por ciento, razón de momio (RM), 10-43, intervalo de confianza (IC) de 95 por ciento, 3.38-33.83. En relación con los voluntarios sanos la RM fue de 1.10, IC de 95 por ciento, 0.68-1.64. Conclusiones. El relujo gastroesofágico en los pacientes con asma bronquial alérgica asociada a síntomas digestivos prevalece más que en pacientes con síntomas digestivos prevalece más que en pacientes son síntomas digestivos similares a los de los asmáticos, pero sin asma bronquial y también más que en los voluntarios sanos